細胞培養操(cao)作規程，供參考
一(yi)．培養基及培養凍存條件準(zhun)備：
1） 準備(bei)F-12K培養(yang)基；優質胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)，10%；雙抗，1%。
2） 培(pei)養(yang)條件： 氣相：空氣，95%；二(er)氧化碳(tan)，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液(ye)：90%血清，10%DMSO，現用(yong)現配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含(han)有1mL細胞懸液的凍存(cun)管迅速放入37℃水(shui)浴中（水(shui)面要低于凍存管(guan)蓋部）搖晃解(jie)凍，移入事先準備好(hao)的含有4mL培(pei)養基的15ml離心管中混(hun)合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄(qi)去上清液，加入1mL培養(yang)基后(hou)吹勻。然后(hou)將(jiang)所有細胞懸(xuan)液移入含有5ml培(pei)養基的培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過夜。第(di)二天(tian)換液并檢查細(xi)胞密度。
2） 細(xi)胞傳代：如果細(xi)胞密度達(da)80%-90%，即可(ke)進(jin)行傳代培養。

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公(gong)司細胞現(xian)貨(huo)供(gong)應(ying)，質量有保證、*、實驗效果(guo)好，我司為您提供(gong)免(mian)費(fei)代測服務，同時提供(gong)最(zui)新價格(ge)、說明(ming)書、規格(ge)、用(yong)(yong)途、實驗原理等相關操作說明(ming)。公(gong)司產品(pin)僅用(yong)(yong)于科研，不得用(yong)(yong)于臨(lin)床(chuang)．

注意事項：
1.收(shou)到細胞后，若(ruo)發現干冰已揮發干凈(jing)、凍存管瓶蓋脫落、破損(sun)及細胞有(you)污染(ran)，請立即(ji)與我們聯系。
2.收到(dao)細胞先不開瓶蓋，瓶身擦(ca)拭酒精后放在(zai)培(pei)養箱靜置2-4小(xiao)時（視(shi)細(xi)胞(bao)密度而定）穩定細(xi)胞(bao)狀態。接著在倒置顯微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)生(sheng)長情(qing)況，并對細(xi)胞(bao)進行不同倍數拍(pai)照（建議收細(xi)胞(bao)時就(jiu)整體(ti)(ti)外觀(guan)拍(pai)一張照片，觀(guan)察培(pei)養基的顏(yan)色(se)和是否有(you)漏液情(qing)況，隨后在顯微鏡下(xia)拍(pai)下(xia)細(xi)胞(bao)狀態，100*，200*各一(yi)張），觀察記錄細胞在運(yun)輸過程中是否有污染(ran)情況(kuang)。作為我方進行銷(xiao)售(shou)依據。
3.由(you)于細(xi)胞狀(zhuang)態受環(huan)境、操作(zuo)和(he)運(yun)輸等多方面因素影響(xiang)，故本公司只保(bao)證客(ke)戶收到細(xi)胞后(hou)一周內的細(xi)胞狀(zhuang)態，故客(ke)戶需(xu)要售后(hou)時(shi)(shi)需(xu)出(chu)示收到細(xi)胞的時(shi)(shi)間(jian)證明及客(ke)戶提供收貨時(shi)(shi)間(jian)和(he)發現問題后(hou)客(ke)服人員溝(gou)通的時(shi)(shi)間(jian)證明，期間(jian)間(jian)隔時(shi)(shi)間(jian)不能大于7天。
4.所(suo)(suo)有(you)(you)動物(wu)(wu)細胞均(jun)視為有(you)(you)潛在的(de)生(sheng)物(wu)(wu)危害(hai)性，必須在二級(ji)生(sheng)物(wu)(wu)安全臺內操作(zuo)，并請(qing)注意防護，所(suo)(suo)有(you)(you)廢液(ye)及接觸(chu)過此細胞的(de)器皿需要滅菌后(hou)方能丟(diu)棄。
腺(xian)苷酸(suan)環化酶9抗體(ti)

細胞培(pei)養(yang)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達(da)到80-90%時即可(ke)傳代
①棄去(qu)培養上清，用PBS或(huo)生(sheng)理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使(shi)胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好(hao)放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡(jing)下(xia)觀察細胞(bao)，若大部分細胞(bao)回縮且有少量細胞(bao)脫(tuo)落，輕輕吹(chui)打(da)下(xia)確認消化(hua)情況(kuang)后加入*培(pei)養基終止(zhi)(zhi)消化(hua)；若細胞(bao)還是貼壁，放回培(pei)養箱繼續(xu)消化(hua)至(zhi)可以(yi)輕輕吹(chui)打(da)下(xia)為止(zhi)(zhi)；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下(xia)離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重(zhong)懸后加(jia)入(ru)培養瓶或皿中，T25培養瓶(ping)加6-8ml培養基；
⑥懸(xuan)(xuan)浮細(xi)胞直(zhi)接離心(xin)收集(ji)，細(xi)胞沉淀重懸(xuan)(xuan)后分到新培養瓶中。
2、細(xi)胞復蘇：
①將凍(dong)存(cun)管在37℃溫水中快速搖(yao)晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混(hun)勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加(jia)1-2ml培養(yang)基吹(chui)勻，將細胞懸(xuan)液加(jia)(jia)入培養(yang)瓶中，補加(jia)(jia)適量培養(yang)基。
3、細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待細(xi)胞(bao)生長狀態良好時進(jin)行細(xi)胞(bao)凍存(cun)保種(zhong)
①棄去培養(yang)上(shang)清，用PBS或生(sheng)理鹽水清(qing)洗1-2次，加(jia)入1mL 0.25%胰蛋白酶(mei)（T25瓶(ping)）
②1-2min后(hou)，顯(xian)微鏡下觀察(cha)細胞(bao)(bao)，大(da)部分細胞(bao)(bao)回縮(suo)且有少量細胞(bao)(bao)脫落(luo)，輕(qing)輕(qing)吹打下確認消化(hua)情況后(hou)加(jia)入*培(pei)養基終止消化(hua)；
③將細胞懸液1000RPM左右條(tiao)件下離心(xin)4min，棄(qi)上清(qing)，加1ml凍存液重(zhong)懸細胞；
④將凍存管放(fang)入(ru)程序(xu)降溫(wen)盒，放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，4小時后將凍存管轉(zhuan)入液(ye)氮罐儲(chu)存。

SHH Others Human 人 SHH / Sonic hedgehog (aa 198-462) 人(ren)細胞裂解(jie)液 (陽性對照) Tin(IV)oxide白色氧(yang)化(hua)錫5克AR，99%

大鼠前脂肪細胞*培養基 100mL氘代醋-D4 cCqTIC-D3 cCID-D 1186-2-3

B16-F0小鼠色素瘤細胞 B16-F0 mouse melanoma cells DMEM+10% FBS羥基(ji)1灰(hui)石(shi) (高(gao)分辨... Hydroxyapatite (high resolution) 1306-06-5 10G 分離試劑(ji)

IFNA4 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IFNA4 / IFNα4 / Ierferon alpha-4 蛋白 (Fc 標(biao)簽)wo7iumlactate乳(ru)酸鈉(na)100U高，98%

KATO III(人胃癌(ai)細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 敗毒梭(suo)菌(jun)Closidium septicumGoldView 1ml/10ml 國產
壞死(si)因子腺嘌呤核苷(gan)(gan)（腺苷(gan)(gan)）（標準品）Adenosine質(zhi)量規格：HPLC>98%,標準品

人(ren)主動脈(mo)內皮細胞 (HAEC)( 5×105 ) BRL 3A, 大鼠肝正(zheng)常細胞 Rattus鹽酸阿地(di)芬(fen)寧(ning)Adiphenine HCl質量(liang)規(gui)格：含量(liang)> 99%

小鼠瘤細胞;EL4鹽酸(suan)阿地芬寧(標準品)Adiphenine HCl質量規格：HPLC>98%,標(biao)準品(pin)

TFRC Others Mouse 小鼠 TFRC / CD71 / ansferrin Receptor 人細胞裂解液 (陽(yang)性對照(zhao)) 醋(cu)酸阿拉瑞(rui)林/丙(bing)氨瑞林 Alarelin Acetate質(zhi)量規格：>98%,BR

MCF-7 人(ren)癌細(xi)胞阿侖1酸鈉Alendronate 質量規格(ge)：>99%,USP
大鼠(shu)胰(yi)島β細胞(bao)瘤細胞(bao)EGF Protein Mouse 重組小鼠(shu) EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白L-苯丙氨酸甲酯鹽(yan)酸鹽(yan)L-Phenylalanine methyl ester 質量(liang)規格：>99%,BR

MKN-28(人胃癌高轉移細胞) 5×106cells/瓶×2 腦微血(xue)管內皮(pi)細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)L-(-)-葡萄糖(標準品)L-(-)-Glucose質量規格：>98%,標準(zhun)品(pin)

前列(lie)腺上皮細胞(bao)培養基PEpiCM7-酮(tong)基去(qu)氫表雄酮(tong)7-Keto-dehydroepiandrosterone質(zhi)量(liang)規格：>98%

SELE Others Rat 大鼠 E-selectin / ELAM-1 / CD62E 人細胞裂解(jie)液 (陽性對照) 硝酸銣(ru)Rubidium nitrate質量規(gui)格：>99%

GES-1 人胃粘膜細胞CHIR-99021 (CT99021.HCl)CHIR-99021 (CT99021) HCl質量規格：>99%,GSK-3α/β抑制劑
細胞(bao)接(jie)受后的處理：
1） 收到細(xi)胞后，請檢查是否漏液，如果(guo)漏液，請拍(pai)照片發給我們。若發現污染(ran)或疑(yi)似污染(ran)，請及時與我們取得(de)聯系。
2） 請(qing)先在顯微鏡下確(que)認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25瓶(ping)置于(yu)37℃培(pei)養約2-3h。
3） 棄(qi)去T25瓶(ping)中(zhong)的培養基(ji)，添(tian)加6ml新的的*培養(yang)基。
4） 如果細(xi)胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代(dai)。
5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否(fou)污(wu)染，

• 人胃癌耐藥株Docetaxel多西他賽
• K562/Adr
• 1×10E6T25/管人肺癌耐順鉑耐藥株
• 1×10E6T25/管人結腸癌長春新堿耐藥株
• 人卵巢癌順鉑耐藥細胞
• 人前列腺癌耐藥株
• 1×10E6T25/管人肺癌紫杉醇耐藥株
• 1×10E6T25/管人鼻咽癌細胞鉑耐藥株
• 1×10E6T25/管人肺腺癌耐藥細胞株
• 1×10E6T25/管人胰腺腺癌鉑耐藥株