冷凍保存細胞之方法？
冷凍(dong)保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分(fen)鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或(huo)隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期(qi)儲存。
冷凍保存方法(fa)二: 冷(leng)凍管(guan)置于已設定程(cheng)序之可程(cheng)序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至(zhi)–80 ℃ 以(yi)下， 再放入液氮槽(cao)vapor phase長(chang)期儲存。*-20 ℃不可(ke)超過1 小時， 以防止冰晶過(guo)大，造(zao)成細胞大量死亡，亦(yi)可跳過(guo)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微(wei)降低(di)一些。

實驗操作步驟：  公(gong)司產品(pin)僅用于科研(yan)，不得(de)用于臨床．
a．采用認可的方案處(chu)死嚙(nie)齒動物。    
b．立即在(zai)無菌超凈臺內用(yong)70％乙醇(chun)擦(ca)洗整個動物。  
c．用無菌(jun)的鑷(nie)子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌(jun)鑷(nie)子將皮膚扯向后腿。   
d．用(yong)另一(yi)無菌的(de)剪(jian)刀和(he)鑷子切(qie)開腹部，取(qu)出含有胚胎的(de)子宮(gong)，置(zhi)于無菌的(de)培養皿上。   
e．剔除胚(pei)胎(tai)周圍的包膜(mo)，將胚(pei)胎(tai)放(fang)于(yu)無菌的含有(you)無菌PBS的(de)100ml燒杯中。   
f．漂洗胚(pei)胎，去(qu)掉PBS。繼(ji)續用PBS漂洗胚胎直至清洗液(ye)清亮(liang)為止。

實(shi)驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小(xiao)牛(niu)血清（FCS) 1瓶(ping)；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(ge)； 
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養皿1個(ge)，細(xi)胞(bao)培養瓶1個 
5、1ml ，200μl移(yi)液(ye)器各(ge)1支(zhi)；槍頭(tou)盒2個；無菌玻璃攪拌棒(bang)1個 
6、細胞計(ji)數板1塊； 
7、滅(mie)好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；
細胞(bao)培養(yang)的優(you)點：
1.研究(jiu)的對象是活(huo)細胞
在實驗過程中(zhong)，根據(ju)要求可始終保持細(xi)(xi)胞(bao)活(huo)力(li)，并可長(chang)時(shi)間監控、檢測甚至定量評估一部分活(huo)細(xi)(xi)胞(bao)的(de)情況，包括活(huo)細(xi)(xi)胞(bao)的(de)形態、結(jie)構、生命活(huo)動等(deng)。
2.研究條件(jian)可以人為(wei)控制(zhi)
pH、溫度、氧氣、二氧化(hua)碳、張力等(deng)(deng)物理(li)化(hua)學的(de)條(tiao)件，可(ke)以根(gen)據實(shi)際需要進行人為的(de)控制，同(tong)時(shi)，可(ke)以施加(jia)化(hua)學、物理(li)、生物等(deng)(deng)因(yin)素(su)作為條(tiao)件而進行實(shi)驗觀察，這些因(yin)素(su)同(tong)樣(yang)可(ke)以處于嚴格控制之(zhi)下。
3.研究的樣本可以達到(dao)比較均一性
通過細胞(bao)培養一定代數后，所得到(dao)的細胞(bao)系(xi)則可(ke)以達(da)到(dao)均(jun)一性(xing)而屬(shu)于(yu)同一類(lei)型的細胞(bao)，需要時(shi)，可(ke)采用克隆化等方法使細胞(bao)達(da)到(dao)純(chun)化。
4.研究(jiu)內容便于觀察、檢測和記(ji)錄
采用各種(zhong)研究技術(shu)：如倒(dao)置生物顯微(wei)(wei)鏡(jing)、熒(ying)光(guang)顯微(wei)(wei)鏡(jing)、電子(zi)顯微(wei)(wei)鏡(jing)、流式(shi)細胞術(shu)、激光(guang)共焦顯微(wei)(wei)鏡(jing)、免疫組織化學(xue)、原位雜交(jiao)、同(tong)位素標記等各種(zhong)儀器設備(bei) 
記錄方式(shi)可采用攝(she)影(ying)照片、縮時電影(ying)、電視等多(duo)種手段。
5.研究的范圍(wei)比較廣泛
應用的學(xue)科領域較為寬廣，如細胞(bao)學(xue)、免疫(yi)學(xue)、腫瘤學(xue)、生物(wu)化學(xue)、遺傳學(xue)、分子生物(wu)學(xue)等；
適用(yong)的(de)對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的(de)不(bu)同年(nian)齡階段以及(ji)不(bu)同組織，都可(ke)進行(xing)有(you)針對性的(de)研究。
6.研究的費(fei)用相對較經(jing)濟
可提供大(da)量、同一(yi)時期、重復性(xing)好的、生物(wu)學(xue)性(xing)狀相似的實驗對象。

細胞凍存：
對培養(yang)的細(xi)(xi)胞進(jin)行凍存(cun)的最佳方法(fa)是將細(xi)(xi)胞置于含有(you)(DMSO)等(deng)冷(leng)凍保護劑(ji)(ji)的*培養(yang)基(ji)中于液氮中儲存。冷(leng)凍保護劑(ji)(ji)可降(jiang)低培養(yang)基(ji)的冰點(dian)，并(bing)可減緩冷(leng)卻速度嗎，大大降(jiang)低冰晶形成的危險(xian)  (冰晶可損傷細(xi)胞(bao)，導致細(xi)胞(bao)死亡)。
注：DMSO 可促進有(you)機分子進入組織。操作含DMSO的(de)(de)試(shi)劑時，應(ying)采用與(yu)此(ci)類物(wu)質安(an)全危害相適應(ying)的(de)(de)設備和操(cao)作規范，并應(ying)按照當地法規處置此(ci)類試(shi)劑。 
細(xi)胞凍(dong)存指(zhi)導原則(ze)
凍存細胞(bao)系以(yi)備將來之(zhi)用時，必須遵守(shou)以(yi)下原則。與(yu)其(qi)他(ta)細胞(bao)培養操作一樣，我們建議(yi)您嚴格遵守(shou)您所用細胞(bao)系附帶的(de)操作說明，以(yi)便獲得最佳結(jie)果。 
1）在高細(xi)(xi)胞濃度情(qing)況下(xia)進行培(pei)養細(xi)(xi)胞的(de)凍存，并且細(xi)(xi)胞傳(chuan)代次(ci)數盡可能(neng)少。確(que)保(bao)凍存前活細(xi)(xi)胞百分比(bi)至少為90%。請注意最佳(jia)凍存條件取決于所用細胞系。 
2）細胞應緩慢冷凍(dong)，可使(shi)用可控制降溫(wen)(wen)速度的低(di)溫(wen)(wen)冰箱或者(zhe)低(di)溫(wen)(wen)冷凍(dong)容器使(shi)溫(wen)(wen)度每分鐘(zhong)大約降低(di)1°C。
3）必須使用推薦的凍存(cun)培養(yang)基(ji)(ji)。凍存(cun)培養(yang)基(ji)(ji)中應(ying)含(han)有 DMSO 或(huo)者甘油等冷凍保護劑
4）將冷凍的細胞于 -70°C 以(yi)下溫度儲存；溫度高(gao)于 -50°C 時，冷(leng)凍(dong)的細(xi)胞將開始變質(zhi)。 
5）必須使用無(wu)菌凍(dong)存管儲存冷(leng)凍(dong)的(de)細胞。裝(zhuang)有(you)冷(leng)凍(dong)細胞的(de)凍(dong)存管可(ke)浸于液氮(dan)或(huo)者在液氮(dan)上方的(de)氣相空間(jian)內(nei)保存 
6）必須穿戴個人防護設備。 
7）所有與細(xi)胞接觸的溶(rong)液(ye)和設備均應為無菌狀態。必須采用正確的無菌技術，并且在(zai)層流通風櫥(chu)內進(jin)行。
RIOK1 Others Human 人 RIOK1 / RIO kinase 1 桿狀(zhuang)病毒(du)-昆(kun)蟲細胞裂解液 (陽性對照) 鈣鐵石，英(ying)文名或英(ying)文縮寫：Kieselguhr，級別(bie)：BR，97%，規格：25克

少突(tu)膠質細胞培養基(ji)OM加醋銨;蟻(yi)醋銨 cMMoniuM forMctq 240-69-

非洲綠猴腎細(xi)胞(bao);CV-1 人二(er)倍體胚(pei)肺(fei)細胞(bao)，WI-38細胞 SHG-44(膠(jiao)質瘤細(xi)胞(bao))還原輔(fu)酶Ⅰ抑制劑，英(ying)文(wen)名或英(ying)文(wen)縮寫：NADH Inhibitor，級(ji)別：高，60u/mg，規格：5克(ke)

EB病毒轉化(hua)的人(ren)B細胞;KMY0920本酸(suan)鉀鹽(yan)，英文名或英文縮寫：potewwium benzoate，級別(bie)：CP，規(gui)格：10克

CD36 Others Mouse 小鼠(shu) CD36 / GP3B / SCARB3 人細胞裂解液(ye) (陽性對照) Bis-Acrylamide 25g/100g Amresco 0172
LTEP-a-2(人肺腺癌細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2檸檬(meng)酸(suan)鋰四水(>98%,BR)Lithium , tetrahydrate質量(liang)規格：>98%,BR

Promocell C-21160 Airway Epithelial Cell GrowthMedium KIT,呼(hu)吸道上皮細胞生長(chang)培養基套裝 500ml4-甲(jia)基傘形酮酰(xian)-beta-D-吡喃糖苷(gan)MU-Gal質量規格：分(fen)子(zi)生(sheng)物學級(ji)

人支(zhi)氣管(guan)成纖維(wei)細胞HBF4-甲(jia)基傘形酮酰-Β-D-吡喃(nan)葡糖酸苷MU-GLU質量規(gui)格(ge)：>99%，分(fen)子(zi)生物學級

HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Texas/05/2009) 血(xue)凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 4-甲基傘花基1酸鈉三水MUP, di salt, trihydrate質(zhi)量規格：>98%，分(fen)子生物學級(ji)

J774A.1 小(xiao)鼠巨噬細胞1,4-雙(5-苯基-2-噁唑基)苯(>98%,Scint Grade)POPOP質量規(gui)格(ge)：>98%
大鼠胰島素瘤細胞人(ren)張氏肝(gan)細胞;Chang liverO-4-硝基芐基羥胺鹽酸(suan)鹽(>99.0%(HPLC),用于高(gao)效液相色譜標(biao)記(ji))O-4-Nitrobenzylhydroxylamine 質量規格：>99.0%(HPLC),用于高效液相色譜(pu)標記

JAM2 Others Mouse 小鼠 JAM2 / CD322 / VE-JAM 人細胞裂解液 (陽性對照) 7-乙(yi)酰氧(yang)基-4-溴甲基(>98.0%(HPLC)(T),用于高效(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)譜標)7-Acetoxy-4-bromomethylcoumarin質量規格(ge)：>98.0%(HPLC)(T),用于高效液(ye)相色譜(pu)標記

肺泡上皮細胞培養基AEpiCM1-萘乙醇(>98%,BR)1-Naphthalene ethanol質量規(gui)格：>98%,BR

MET Others Canine 狗 c-MET / HGFR 人細胞(bao)裂解液 (陽性對照) 乙酸-1-萘酯(>98%,BR)1-Naphthyl acetate質量規(gui)格：>98%,BR

GPL1 豚鼠肺(fei)成纖維樣細胞二(er)十八烷醇(>98%,BR)1-Octacosanol質(zhi)量規格(ge)：>98%,BR
實驗操作(zuo)：
1、培養瓶預(yu)包被。試驗(yan)前一天預(yu)包培養瓶，置于超靜臺吹(chui)干或45℃烘(hong)箱(xiang)烘(hong)干（切記保持(chi)無菌），4℃冰箱放置(zhi)，備用。
2、取材：正(zheng)常成年(nian)大鼠腹腔注射5%麻醉，75%酒(jiu)精(jing)浸泡，無菌條(tiao)件下迅(xun)速取出大鼠主動脈(mo)。
3、材料預處理：將獲取的血管放(fang)入含有(you)1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復洗滌(di)，去(qu)除血管外部的(de)洗滌(di)液澄清(qing)，用無菌鑷子(zi)剝去(qu)外膜(mo)面(mian)的(de)殘留(liu)組織(zhi)。PBS洗滌凈。
4、除(chu)去內(nei)皮細胞(bao)：將血管縱(zong)向剪開， 內膜(mo)面向(xiang)(xiang)上，無菌鑷子沿中軸方向(xiang)(xiang)反復(fu)刮(gua)動內膜(mo)層4-5遍(bian)，去掉內皮細(xi)胞，用(yong)1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離(li)(li)中(zhong)膜(mo)：將(jiang)去掉內(nei)膜(mo)的血管，繼續(xu)刮動分離(li)(li)中(zhong)膜(mo)，去掉外(wai)膜(mo)，用眼科剪(jian)將(jiang)內(nei)膜(mo)剪(jian)碎(sui)為1×1mm3的小塊(kuai)，加入(ru)1 × PBS （pH 7.4 ），轉移(yi)到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收(shou)集沉(chen)淀物。
6、消(xiao)化：在洗凈的(de)內(nei)膜碎塊中加入(ru)消(xiao)化酶液，將(jiang)離(li)心管(guan)放(fang)入(ru)37℃水浴消化15min。
7、終止消(xiao)化：吸出消(xiao)化液入新的離心管(guan)中，按1：1加入(ru)消化(hua)終止液，中止酶反應(ying)；余下的(de)組織繼續加入(ru)消化(hua)液，消化(hua)15min ，重(zhong)復消化3次。
8、收集重懸細(xi)胞(bao)：收集中止后(hou)的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上(shang)清，加(jia)入培養液重懸，染色(se)計(ji)數細胞。
9、培(pei)養細胞密度：調(diao)整細胞密度以5 × 105個/ml 接(jie)種入培養瓶。
10、培養(yang)：放(fang)置于37℃，5% CO2培養箱中。

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• K562/Adr
• 1×10E6T25/管人肺癌耐順鉑耐藥株
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